處理細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染的方法

細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)支原體污染是一個(gè)常見但嚴(yán)重的問題，它會(huì)影響細(xì)胞的生長速度、形態(tài)以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。以下是一些處理細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染的方法：

一、識(shí)別污染

需要識(shí)別是否存在支原體污染。支原體污染通常表現(xiàn)為細(xì)胞生長緩慢、形態(tài)異常、培養(yǎng)基變渾濁以及出現(xiàn)小點(diǎn)狀雜質(zhì)等現(xiàn)象。當(dāng)發(fā)現(xiàn)這些異常時(shí)，應(yīng)懷疑是否存在支原體污染，并可以通過以下方法進(jìn)行檢測(cè)：

PCR檢測(cè)：通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)來檢測(cè)支原體DNA的存在。可使用德國MB 常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒快速檢測(cè)支原體。

熒光顯微鏡觀察：使用熒光標(biāo)記的抗體來檢測(cè)支原體。

培養(yǎng)檢測(cè)：將疑似污染的細(xì)胞培養(yǎng)物接種在特定的培養(yǎng)基上，觀察是否有支原體生長。

二、清理污染

一旦確認(rèn)存在支原體污染，應(yīng)立即采取措施進(jìn)行清理：

隔離受污染的細(xì)胞系：將受污染的細(xì)胞系與其他細(xì)胞系隔離，避免污染進(jìn)一步擴(kuò)散。

徹底清洗孵箱：關(guān)閉細(xì)胞孵箱，將所有細(xì)胞培養(yǎng)物移出，并使用70%的酒精或?qū)Ｓ们鍧崉?duì)孵箱內(nèi)部進(jìn)行徹底清洗，確保無死角。加入WaterShield?水槽支原體預(yù)防試劑可用于常規(guī)水浴環(huán)境、常規(guī)二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中的水槽，并與常見的實(shí)驗(yàn)室表面兼容，例如鍍錫鐵，鉻，鎳鋼，高等級(jí)鋼和銅。對(duì)大多數(shù)細(xì)菌、支原體、原生動(dòng)物、藻類、真菌和酵母都有活性。WaterShield?水槽支原體預(yù)防試劑可防止這些微生物在水浴環(huán)境下生長。

妥善處理移出的細(xì)胞培養(yǎng)物：對(duì)移出的受污染細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)行妥善處理，如高溫高壓滅菌或?qū)ｉT的廢棄物處理，以避免交叉污染。

三、消毒處理

清洗完成后，應(yīng)對(duì)細(xì)胞孵箱和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行消毒處理，以徹底消除支原體污染。常用的消毒方法有：

紫外線照射：使用紫外線燈對(duì)細(xì)胞孵箱和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行照射，以殺滅支原體。

臭氧消毒：利用臭氧的強(qiáng)氧化性來殺滅支原體。

甲醛熏蒸：使用甲醛進(jìn)行熏蒸消毒，但需注意甲醛的毒性和殘留問題。

四、驗(yàn)證消毒效果

消毒完成后，應(yīng)對(duì)細(xì)胞孵箱和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行驗(yàn)證，以確保支原體污染已被徹底消除。可以通過以下方法進(jìn)行驗(yàn)證：

再次進(jìn)行PCR檢測(cè)：檢測(cè)消毒后的細(xì)胞孵箱和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中是否存在支原體DNA。

培養(yǎng)檢測(cè)：將消毒后的細(xì)胞培養(yǎng)物接種在特定的培養(yǎng)基上，觀察是否有支原體生長。

五、預(yù)防再次污染

為了預(yù)防支原體污染的再次發(fā)生，應(yīng)采取以下措施：

嚴(yán)格規(guī)范實(shí)驗(yàn)操作：遵循實(shí)驗(yàn)室清潔和消毒程序，每次實(shí)驗(yàn)操作完成后及時(shí)清理實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，確保沒有殘留物或廢棄物。

使用合格的器皿：選擇高質(zhì)量的器皿和耗材，避免使用有破損或污染的器皿。

防止空氣污染：確保空氣潔凈度，使用空氣過濾器和生物安全柜來提高空氣質(zhì)量。

嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)室人員的衛(wèi)生：實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)保持良好的個(gè)人衛(wèi)生，實(shí)驗(yàn)前要洗手、消毒，穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)服。

定期檢測(cè)微生物污染風(fēng)險(xiǎn)：定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)，以確保沒有微生物滋生。

綜上所述，處理細(xì)胞培養(yǎng)支原體污染需要采取一系列措施，包括識(shí)別污染、清理污染、消毒處理、驗(yàn)證消毒效果以及預(yù)防再次污染。這些措施的實(shí)施將有助于確保細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。