Real - time PCR有哪些應用？

實時定量聚合酶鏈式反應（Real - time PCR），也稱為實時熒光定量 PCR，是一種在 PCR 反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個 PCR 進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

基因表達定量分析

基礎研究方面：在分子生物學基礎研究中，用于研究基因在不同細胞類型、發(fā)育階段以及不同環(huán)境刺激下的表達變化。例如，在胚胎發(fā)育研究中，可以利用 Real - time PCR 來檢測某些關鍵基因在胚胎不同發(fā)育時期的表達量變化，像在果蠅胚胎發(fā)育過程中，通過實時監(jiān)測 hunchback、bicoid 等基因的表達水平，來研究它們對胚胎體節(jié)分化等過程的影響。

醫(yī)學研究方面：在疾病研究中，可用于分析疾病相關基因的表達。以癌癥研究為例，能夠比較癌組織和正常組織中特定基因的表達差異。比如，檢測癌基因 HER - 2 在乳腺癌細胞中的過表達情況，以及抑癌基因 p53 在腫瘤細胞中的表達缺失或降低情況。這些基因表達的變化可以作為疾病診斷、預后評估和治療靶點選擇的重要依據(jù)。

病原體檢測與定量

病毒檢測：在病毒感染的診斷和監(jiān)測中發(fā)揮關鍵作用。對于像 HIV（人類免疫缺陷病毒）、HBV（乙型肝炎病毒）、HCV（丙型肝炎病毒）等病毒感染的檢測，Real - time PCR 可以快速、準確地檢測病毒核酸的存在。而且還能對病毒載量進行定量，例如在 HIV 感染治療過程中，通過定期檢測患者血液中的病毒 RNA 載量，來評估抗病毒治療的效果。在新冠疫情期間，實時熒光定量 PCR 是檢測 SARS - CoV - 2 病毒核酸的主要方法，能夠快速確定個體是否感染以及感染的程度。

細菌和真菌檢測：在細菌感染性疾病診斷中，如檢測結核分枝桿菌來診斷結核病，或者檢測金黃色葡萄球菌在感染傷口中的含量等。對于真菌感染，比如檢測白色念珠菌在口腔或陰道感染中的情況，實時 PCR 能夠提供高靈敏度和特異性的檢測結果，并且可以對病原體的數(shù)量進行估計，有助于判斷感染的嚴重程度。

藥物研發(fā)與藥物療效評估

藥物靶點驗證：在藥物研發(fā)的早期階段，用于驗證藥物靶點基因的表達變化。例如，當研究一種新型抗腫瘤藥物時，通過 Real - time PCR 檢測藥物處理前后腫瘤細胞中靶點基因的表達水平，來確定藥物是否能夠有效地作用于預期的靶點。

藥物療效評估：在臨床治療過程中，評估藥物對基因表達的影響，從而判斷藥物療效。例如，在使用化療藥物治療白血病時，監(jiān)測白血病細胞中某些基因（如 BCR - ABL 融合基因，這是慢性粒細胞白血病的重要分子標志物）的表達變化，來評估化療藥物是否有效地抑制了白血病細胞的增殖和相關基因的表達。

轉基因生物檢測

農業(yè)領域：用于檢測轉基因作物中是否含有轉入的外源基因以及其拷貝數(shù)。在轉基因作物安全性評估和監(jiān)管中是必不可少的工具。例如，檢測轉基因大豆中的抗草甘膦基因，確定其在大豆基因組中的存在和表達情況，以評估轉基因大豆對生態(tài)環(huán)境和人類健康可能產生的影響。

其他生物制品檢測：在檢測轉基因微生物用于生產生物制品（如重組蛋白等）方面也有應用。可以確保微生物中重組基因的正確表達和拷貝數(shù)符合要求，保證生物制品的質量和安全性。

遺傳疾病診斷和產前診斷

單基因遺傳病診斷：對于由單個基因突變引起的遺傳病，如囊性纖維化（CF）、地中海貧血等疾病的診斷。通過檢測相關致病基因的突變位點和表達情況，實現(xiàn)疾病的早期診斷。例如，在囊性纖維化的診斷中，檢測 CFTR 基因的突變情況，確定患者是否攜帶致病突變。

產前診斷：在產前診斷中，可以檢測胎兒細胞中的遺傳物質。例如，對羊水細胞或絨毛細胞進行 Real - time PCR 檢測，用于診斷胎兒是否患有染色體異常疾病（如唐氏綜合征）或單基因遺傳病，為優(yōu)生優(yōu)育提供重要的檢測手段。